标签蛋白大盘点
标签蛋白在大量生产重组蛋白过程中扮演着关键角色,它们与目的蛋白融合表达,用于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化。这些多肽或蛋白统称为标签蛋白。以下是一些常见标签蛋白及其特点的概述。
6*His标签由六个组氨酸残基构成的融合标签,可插入目的蛋白的C末端或N末端。其功能包括构成表位利于纯化和检测,以及通过与镍的强烈吸引力形成独特结构特征,便于通过固定化金属螯合层析(IMAC)进行纯化。
Flag标签为编码8个氨基酸的亲水性多肽,具有独特的结构,允许在不同环境下纯化蛋白,包括非离子型表面活性剂存在或变性条件下,尤其适用于纯化疏水性强或包涵体蛋白。它的低免疫原性使其适合直接用于动物免疫制备抗体。
HA标签源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇,易于检测和ELISA检测,适用于检测目的蛋白,对蛋白结构影响较小。
C-Myc标签,包含人类原癌基因Myc中的10个氨基酸片段,通过高特异性的抗Myc单克隆抗体广泛用于检测体系,较少用于纯化。
V5标签来源于副黏液病毒P/V蛋白,适用于哺乳动物和昆虫表达体系,主要用于检测实验,其纯化应用较少。
Avi Tag标签蛋白是一个15个氨基酸的短肽,具有生物素化位点,能有效生物素化目标蛋白,适用于蛋白质分离纯化和相互作用研究。
GST标签蛋白具有谷胱甘肽巯基转移酶活性,适用于原核表达,能提高外源蛋白的可溶性,通过含有还原型谷胱甘肽的琼脂糖凝胶进行纯化,且不影响蛋白的抗原性和生物活性。
SUMO标签蛋白作为重组蛋白表达的融合标签和分子伴侣,能提高表达量、抗蛋白酶水解能力、促进正确折叠和提高可溶性。其优点在于能通过特异酶切高效去除标签蛋白,用于完整切除并得到天然蛋白。
Halo Tag标签蛋白是一种脱卤素酶的遗传修饰衍生物,能与多种合成配基共价结合,适用于检测和亲和结合或固相化目的蛋白。
SNAP-Tag标签技术具有高特异性和稳定性,适用于多种环境下的蛋白质检测与纯化,包括活细胞、溶液或固态相。
MBP标签由大肠杆菌K12的malE基因编码,能增加过量表达的融合蛋白溶解性,特别适用于真核蛋白表达,通过交联淀粉亲和层进一步纯化,适用于检测和去除MBP融合部分。
eGFP、eCFP、eYFP和mCherry是增强型荧光蛋白,由野生型荧光蛋白通过氨基酸突变和密码子优化而来,适用于活细胞探针检测,实时显示目的基因表达情况,广泛应用于基因表达调控、功能研究、定位分析及药物筛选。
荧光素酶作为“报告蛋白”,用于分子生物学研究中的定量分析,具有高灵敏度、宽检测幅度、重复性好和与高通量筛选兼容等优点。萤火虫和海肾荧光素酶因来源不同,结构和底物差异大,相互之间不会产生影响,是理想的双基因报告系统。
多重随机标签